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Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
FSK-101 100次份 RMB 1,950 -20℃ 产品说明书

用途

RT-PCR用cDNA的合成

说明

本试剂盒使用的逆转录酶ReverTra Ace®属于在高温反应性和反应效率方面进行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH-)，与以往的RTase相比，可以合成更长的cDNA(已确认到可以合成cDNA长度最长可达14kb)。


特征

●高效率

使用高效率逆转录酶「ReverTra Ace®」，可以高效率地合成cDNA。


●应用范围广

可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各种逆转录情况。


●确证

因含有阳性对照（positive control）, 可在确证各步骤的同时推进实验进展。

 


实验例

使用ReverTra Ace -α-®以HeLa Total RNA(1μg)为模板，进行cDNA的合成后，使用各种PCR酶，以β-actin(838bp)为目的片段进行PCR反应。cDNA合成反应是在20μl的反应体系中，42℃下反应20min.，接着99℃进行5min的失活处理。然后，向合成的cDNA反应液中加入80μl的PCR溶液，使总体系达100μl，进行PCR反应。


结果显示，所有的酶都确认有扩增，ReverTra Ace -α-®的逆转录产物可适用于各种PCR酶的扩增反应。



产品内容

  • ReverTra Ace®100μl
    5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
    Random Primer〔FSK-301〕100μl
    Oligo(dT)20 Primer 〔FSK-201〕100μl
    10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
    RNase Inhibitor100μl
    RNase Free H2O1.2ml


    *5×RT Buffer与ReverTra® Ace用的Buffer组分相同。


    基本反应条件

    • 〈cDNA合成〉
      灭菌蒸馏水Xμl
      模板RNA
      100-1000ng total RNA
      10-100ng mRNA
      Primer
      1μl Oligo(dT)20 Primer
      1μl Random Primer
      10pmoles* Specific Primer
      5×RT Buffer4μl
      10mM dNTPs2μl
      ReverTra Ace®1μl
      RNase Inhibitor1μl

      Total Volume20μl



      几点建议

      ● PCR反应液的添加量

      以Taq为基础的PCR酶以及KOD Dash的反应中最多可添加20%，KOD -Plus- 系列及KOD FX 系列的反应中最多可添加4%，推荐最好使用2%以下的逆转录反应液。


      ●模板RNA

      Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。各种情况下使用高纯度的样品时，可以得到较好的结果。


      ●对照体系

      样品在第一次进行RT-PCR时，推荐同时进行对照实验。本试剂盒的对照用G3PDH引物，可适用于human、mouse、rat及swine的对照使用，PCR产物长度0.45kb。

      FAQ请点击这里。


      参考文献

      1)Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)

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