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LDP-101 250U×1支 RMB350 -20℃ 产品说明书

用途

PCR

说明

本酶是在Barnes等方法基础上开发的高效率PCR酶。
将具有强3'→5'核酸外切酶活性(proof-reading活性)的KOD DNA polymerase与通过基因工程手段使3'→5'核酸外切酶活性失活的改良型的改变型KOD DNA polymerase以最佳比例混合,从而实现了卓越的PCR性能。

因为是单一酶系(KOD DNA polymerase与Exo(-) KOD DNA polymerase)构成的,所以最适条件、贮存稳定性及热稳定性都是统一的,能够稳定地发挥其性能。


特征

延伸时间30sec./kb
延伸时间约为Taq DNA Polymerase的一半,最适合于快速PCR。


优良的PCR反应效率
即便是微量的模板DNA也可进行高效率的PCR,因此除普通PCR外,还适用于菌落直接PCR、病毒/细菌等的检测。


优良的耐热性
由于耐热性要比Taq DNA Polymerase好,在热变性步骤温度可以设定为很高,对GC-rich等高级结构的目的片段很有效。


可用于TA克隆
扩增产物可直接用于TA克隆。保真性为Taq的3〜4倍。


产品内容

KOD Dash® (2.5U/μl)100μl
10×Buffer*[LDP-1B]1.2ml
2mM dNTPs[NTP-201]**1ml

*含有终浓度为2mM的Mg2+

** 用本酶进行PCR时,请使用dNTPs[NTP-201]。其他的dNTPs,有时不能充分发挥PCR性能。



组分:

20mM Tris-HCl(pH8.0)

100mM KCl

0.1mM EDTA

1mM DTT

0.5% Tween® 20

0.5% Nonidet® P-40

50% Glycerol



活性的定义:

在75℃活性测定条件下,在30分钟内摄入10nmoles的全核苷酸使成为酸不溶物时所需酶的活性定义为1U。



来源:

E.coli 重组体

注意事项

*酶溶液中虽然含有消防法危险物 第4类 易燃液体 第3石油类 属于水溶性液体的50%的甘油,但是已确认在着火点测试实验中不属于危险物。

几点建议

●PCR产物的克隆

基本上无论哪种方法都可进行TA克隆。

可使用高效率TA克隆试剂盒TArget CloneTM等。


●最适用于菌落直接PCR。

由于本试剂是为高效率且快速的PCR而开发的,因此最适用于菌落直接PCR。

另外,再组合使用菌落直接PCR用预混PCR试剂InsertCheck -Ready- ,可进行更简便的菌落直接PCR。


●关于PCR条件的设定

延伸反应以目的片段30sec./kb为基准。


「确认到smear的情况」

可尝试缩短延伸反应的时间或减少酶量。


「GC-rich等容易形成高级结构的模板的情况」

本酶有很高的耐热性,可在96℃以上进行变性反应。




FAQ请点击


参考文献

1) M. Morikawa et al., Appli. Environ. Microbiol.60: 4559-4566(1994)
2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol.63: 4504-4510(1997)
3) M. Nishioka et al., J. Biotechnology88: 141-149(2001)
4) W. M. Barnes, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 2216-2220(1994)
5) H. Kanzaki, J. Bone and Mineral Res.17: 210-220(2002)
6) H. Nakayashiki et al., Genetics153: 693-703(1999)

7) A. Kikuchi et al., Gene236: 293-301(1999)


使用本产品表的文章:
1) H. Sawai et al., Chem. Commun., 2604-2605.(2001)
2) Y. Ogawara et al., J. Biol. Chem., 277(24): 21843-21850(2002)
3) T. Ohbayashi et al., Org. Biomol. Chem.3: 2463-2468. (2005)


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