使用互补引物,通过突变导入法,在约5 kb的质粒中进行突变导入(3碱基置换、3碱基缺失、3碱基插入)。




使用KOD OneTM PCR Master Mix,即使长度为5 kb的质粒,也可以通过延伸时间25 sec.的高速循环条件进行突变导入。通过测序可以确认得到的克隆基本都突变成功,并且没有除目的位点以外的突变发生。




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