用各种方法从混合肥料(堆肥)中抽提出粗DNA溶液,以该DNA溶液处理后的上清为样品,用原核生物共同的引物进行rDNA扩增。结果可见,用碱裂解法和一步法配制的样品,与常见的CTAB法得到的样品,可得到同等的扩增效果(下图)。



继续探讨,由于KOD FX Neo的PCR产物末端已被平滑化,用专用的TA克隆试剂「TArget Clone -Plus-」克隆后再进行测序分析。结果可见,96个克隆均得到了良好的测序结果。同时从分析的结果可知,用各种粗抽提法得到的序列也同样有好的结果。(碱裂解法、一步法等虽然非常简便,但初次使用时,为避免被污染的风险,建议事先与以往的方法进行比较后再开始实验)。
  此外,使用碱裂解法得到的上清、各种扩增试剂、3种通用引物进行rDNA扩增,结果可见,用KOD FX Neo可得到最好的结果(下图)。


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