KOD FX Neo
实验例9:判定 ES细胞的基因重组

【数据提供者】

群马大学先端科学研究指导者养成单位  

山本 正道 老师

【样品】ES细胞的基因组DNA

【样品处理】
ES细胞用蛋白酶K溶解后，用酚/氯仿→氯仿→异丙醇沉淀后溶解于TE溶液中。

【基因名称】在ROSA26区域中敲入特定的cDNA

【目的片段长】7011bp

【反应条件】
DW                                  　 11-X  μL
2XBuffer  for KOD FX Neo     　25   μL
2mM dNTPs                            10   μL
10 pmol/ml  Primer F               1.5 μL
10 pmol/ml  Primer R               1.5 μL
Template DNA                         X    μL
KOD FX                                   1    μL　　　　
　　　　　　　　　　                50   μL

【PCR循环】

KOD FX Neo:

※使用其他的试剂时，请按使用说明书的最适条件进行反应。

【评论】

　使用KOD FX Neo时，虽然用一般的PCR条件(3-step cycle)就可能检测出来，但是如果用step-down的PCR条件, 则可能更加明确的检测出来。而使用A公司的高效率PCR酶时，虽然这次检测到了，但是之前有时检测的到，有时检测不到。感觉这种情况跟DNA的量及酶量有关。A公司高效率PCR酶的用量需要增加到推荐用量的2.5倍左右才有可能检测到。A公司的Long PCR酶完全检测不出来。