序列信息较少，只能在Open Reading Frame(ORF)的末端设计引物时，不一定能设计出最佳的引物。下面，以较难设计普通引物的目的片段为例，对MAPK1基因(参照下面)的ORF进行扩增，其他公司产品的PCR按各公司推荐的循环条件，比较结果。
●Target：
NM_002745 Homo sapiens mitogen-activated protein kinase 1 (MAPK1), transcript variant 1
●引物：
设计为从开始密码子(MAPK1_F下划线)到终止密码子(MAPK1_R下划线)扩增
MAPK1_F：ATGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGCGCGGGC(30mer)
MAPK1_R：TTAAGATCTGTATCCTGGCTGGAATCTAGC(30mer)
| 【探讨】MAPK1_F引物的GC含量非常高，不能说是最佳引物，但使用KOD FX，只需一次便能确认到明亮的扩增。 |
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