使用KOD FX无需对Mouse tail Lysate进行烦杂的抽提即可进行PCR扩增。以下为Mouse tail Lysate的简单配制方法。
「Mouse tail的前处理方法」
＜注意＞
1. 接触热碱性溶液时，请务必十分小心。
2. 推荐将用Proteinase K配制的Lysate直接用于PCR。Proteinase K与SDS对PCR反应没有不良影响，无需担心。
请注意，使用时需纯化。
想对Lysate直接进行PCR时，推荐使用上述的『碱裂解法』。 |
Mouse tail lysate的直接PCR扩增与其他公司产品的比较 |
【PCR条件】 样品：用水将上述方法配制得到的Lysate10倍稀释
0.5 μl / 50 μl Reaction
目的片段：Mouse membrane glycoprotein (Thy-1) gene 2.6kb
引物： Primer#1 :5’-CCACAGAATCCAAGTCGGAACTCTTG-3’
Primer#2 :5’-GTAGCAGTGGTGGTATTATACATGGTG-3’ <反应条件>
终浓度
2x PCR buffer 25 μl 1×
2mM dNTPs 10 μl 0.4mM each
10pmol /μl Primer #1 1.5 μl 0.3μM
10pmol /μl Primer #2 1.5 μl 0.3μM
Mouse Tail Lysate 0.5 μl
KOD FX (1.0U/μl) 1 μl 1.0 U / 50μl
PCR grade water 10.5 μl
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Total reaction volume 50 μl 循环条件>
94℃ 2min.
(98℃ 10sec,68℃ 2.5min.)×30cycles 其他公司产品的PCR该各公司推荐的循环条件进行。
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KOD FX对全血等粗样品也无需烦杂的前处理，
可直接进行PCR。 |
