KOD FX
实验例14: 直接使用鼠尾裂解液：转基因鼠的基因分型

【目的】

直接使用Mouse tail溶解液，进行转基因小鼠的基因分型，并进行同源性/异源性判定。被插入基因周围的序列如下。

【方法】

1. 配制Mouse tail Lysate(碱裂解法)

Mouse tail用如下的方法(碱裂解法)进行简单地处理，取上清1 μl进行PCR反应。

【碱裂解法】

2.　PCR　
● KOD FX (TOYOBO)
＜反应条件＞
2x PCR buffer for KOD FX                     25 μl
2mM dNTPs                                            10 μl
10pmol /μl Primer #1                            1.5 μl
10pmol /μl Primer #2                            1.5 μl
Mouse tailLysate                                    1 μl
PCR grade water                                   10 μl
KOD FX (1.0U/μl)                                    1 μl　
-------------------------------------------------------------------　　　　
Total reaction volume                           50 μl

＜PCR循环条件＞
94℃　1min.
(98℃　10sec.,68℃　3min.)×30cycles

● A公司高效率PCR酶 
＜反应条件＞
使用推荐条件

＜PCR循环条件＞
(98℃　10sec.,68℃　3min.)×30cycles

● B公司高效率PCR酶 
＜反应条件＞
使用推荐条件

＜PCR循环条件＞
94℃　1min.
(98℃　10sec.,68℃　3min.)×30cycles
72℃　10min.

【结果】
取PCR扩增产物5μl用1％琼脂糖凝胶电泳进行分析。
结果可见，只有用KOD FX的情况下，各片段均可得到均一的扩增。

KOD FX还可直接对全血、植物样品(叶、米粒)、酵母进行扩增，无需任何前处理！
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