KOD FX
实验例26: 新的水稻OsSRS3基因5′端区域的分离

【基因名】稻OsSRS3(5’ 区域的GC含量为约80%)

【样品】稻花芽由来的cDNA

【目的片段长】2.4kb

【引物】
Forward 20mer  5’-TCCCGGCCTGACCTCTCTAC-3’
Reverse 20mer  5’-CAAAGTCGCCGAGAGATGAC-3’

【循环】
KOD-Plus-：推荐条件(30cycles)
其他公司酶：推荐条件(30cycles)
KOD-FX：94℃ 2 min
　　　　(98℃ 10 sec,68 ℃ 3 min)×30cycles
　　　　4℃ ∞

【反应液组成(KOD FX使用例)】
2×PCR buffer for KOD FX   　　　 25μl
2mM   dNTPs　　　         　　　　10μl
10pmol / μl Primer#1       　　　　1.5μl
10pmol / μl Primer#2      　　　    1.5μl
Template                         　　　　     1μl
KOD FX (1.0U /μl)            　　　　   1μl
dH2O                             　　　　　  10μl
-----------------------------------------------------------
Total                           　　　　　　  50μl

【数据提供】
福井县立大学生物资源学部　　
北川 佳名子 老师、隐歧 胜幸 老师、岩崎 行玄 老师

【来自老师的评语】
至今为止Nested PCR也无法得到扩增的基因，用KOD FX进行一次PCR便得到了明亮的扩增。同时克隆产物的测序结果也是正确的。