KOD FX
实验例27: 使用从人粪便提纯的DNA扩增Helicobacter pylori cagA基因

【基因名】
Helicobacter pylori cagA

【样品】
用QIAmp DNA stool mini kit (QIAGEN)纯化人粪便得到的DNA

【目的片段长】
239bp

【引物条件】
1st PCR Forward:AACCAATCGTTGATAAGAAYGATAG
1st PCR Reverse:TGTTGATTTTAGAYGGATCKTTTTG

2nd PCR Forward:GAAYGATAGGGATAAYAGGC
2nd PCR Reverse:CKTTTTGAWGRGACACCCAA
（K：G/T,Y：C/T,W：A/T）

【循环】
●A公司　PCR试剂
95 ℃ 10min
↓
(94 ℃ 30sec,50 ℃ 60sec,72 ℃ 30sec)×30Cycles

●KOD -Plus-
94 ℃ 2min
↓
(94 ℃ 15sec,53 ℃ 30sec,68℃ 30sec)×40Cycles

●KOD  FX (1st PCR)
94 ℃ 2min
↓
(98 ℃ 10sec,55 ℃ 30sec,68℃ 30sec)×50Cycles

●KOD  FX (2nd PCR)
94 ℃ 2min
↓
(98 ℃ 10sec,56 ℃ 30sec,68℃ 30sec)×50Cycles

【数据提供】
大阪大学研究生院 医学系研究科
保健学专业 活体信息科学教研室
山本 容正 老师、平井 到 老师、纪本 爱 老师

【来自老师的评语】
使用KOD FX之前，使用并探讨过好几种酶的条件，但总得不到满意的扩增。
使用了KOD FX，无论是扩增还是特异性都得到了显著的提升。