KOD FX
实验例38: 用KOD FX对曲霉菌Aspergillus oryzae基因破坏的确认

※本实验例发表在第61次 日本生物工学会大会(2009)上。

【背景】

进行曲霉菌基因破坏时进行确认，过去要进行DNA的抽提，非常麻烦，而本实验使用KOD FX，以只在溶液中加热过的曲霉菌的分生孢子为样品进行扩增，判定基因类型。

【样品】曲霉菌基因破坏候选菌株的分生孢子 

【样品的处理】  ①取微量孢子在Buffer*（50 μl）中悬浊
                  　                     *Buffer:100 mM Tris-HCl (pH 9.5), 1 M KCl, 10 mM EDTA

                     　            ②95℃10分钟 →Vortex →上清1 μl / 50 μl PCR反应液





【基因名】推定酸性推定酸性羧肽酶carboxypeptidase(ACP)基因

【目的片段】3.6~5.2 kb

 Fig. 1 引物的位置与扩增产物的大小

【反应液组成】取如说明书中记载

【PCR循环】

94℃, 2min.
　 ↓
[ 98℃, 10sec    68℃, 5min ]　(35cycles)

【结果】

可明确地判定基因破坏菌株。

【评语】

过去，对曲霉菌、丝状菌等进行菌落PCR很困难，要判定基因破坏菌株时，需要抽提纯化基因组DNA，而使用KOD FX则无需该操作，可简便地对多重样品的克隆的基因类型进行判别。

【数据提供】

白鹤酒造株式会社 研究开发室
山下 伸雄 老师