本研究中,使用了QuantAccuracy® RT-RamDA® cDNA合成试剂盒,与D公司、E公司有扩增能力的逆转录试剂盒以及F公司无扩增能力的逆转录试剂盒,分别对人FFPE样本来源的纯化RNA(100pg、1ng)进行了cDNA的制备,并通过使用本公司的THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(Code QPS-201) 定量试剂对2种核内RNA基因(NEAT1、MALAT1)和8种管家基因(β-actin、GAPDH、ATP5F1A、YWHAZ、PPIA、B2M、RPS18、HPRT1)进行了定量分析。
由下表可知,比较了使用100pg RNA制备的各基因的检测率。结果显示,无论哪种基因,使用本试剂盒,均表现出最高的检测率。
实验例4-2
在本实验中,我们又以 100pg 和 1ng 的RNA作为模板进行cDNA合成,并通过qPCR扩增比较Ct值。对100pg和1ng RNA的Ct值连成直线分析。结果表明,仅在使用本产品时,线与线之间是平行的,几乎不存在扩增效率的差异。
此外,我们还根据100pg和1ng Ct平均值计算了两个浓度间的ΔCt值,约为3.40。说明,使用本产品,即使是FFPE样本来源的RNA,偏差也很小,可以进行分析。