高效率TA克隆试剂盒

TArget Clone™/TArget Clone™-Plus-

价格表

TArget Clone™

Code No.	包装	价格	保存温度	说明书
TAK-101	10次份	RMB 300	-20℃

TArget Clone™-Plus-

Code No.	包装	价格	保存温度	说明书
TAK-201	10次份	RMB 380	-20℃

用途

●普通的TA克隆「TArget CloneTM」

●KOD系列扩增得到的平滑末端产物的TA克隆「TArget CloneTM -Plus-」

●对KOD系列扩增得到的平滑末端产物进行加dA反应「10×A-attachment Mix 」

说明

本品是高效率TA克隆试剂盒。Taq系列酶扩增的PCR产物及KOD系列酶扩增的平滑末端PCR产物均可直接进行TA克隆。Taq、Tth DNA polymerase、Blend Taq®、KOD Dash等酶的扩增产物的3'末端通常带有dA,可直接与T载体连接(→使用TArget Clone^TM)。
另外，KOD系列(KOD -Plus-系列以及KOD FX系列)的PCR产物的3'末端基本已被平滑化，PCR产物不能直接进行TA克隆。为了使扩增产物能够进行TA克隆，可使用TArget Clone^TM -Plus-，用10×A-attachment Mix在平滑末端添加碱基(主要是dA)。
10×A-attachment Mix中含有对末端添加碱基的Taq DNA polymerase和用来中和反应后残留的KOD的3'→5'Exonuclease活性(校正活性)的抗KOD抗体。

特征

●快速・高效率
连接反应最快可在5分钟内完成。

●可靠
载体中有LacZ，可进行蓝白斑筛选。

●方便
在多克隆位点的两端带有转录用的启动子(T7、T3)，可用于转录产物的配制。

●可用于平滑末端PCR产物《TArget Clone -Plus-》
在TA克隆试剂盒中添附了『A-attachment Mix』，使用更方便，是KOD系列专用的TA克隆试剂盒。平滑末端PCR产物无需纯化，将其与『A-attachment Mix』混合，只需10分钟即可完成加dA反应。

实验例

使用各类PCR产物比较TA克隆的效率用高保真性酶KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2及Blend Taq，对来自human genome的β-globin基因0.5kb进行PCR扩增。分别用TArget Clone以及TArget Clone^TM -Plus-对未经纯化的PCR产物进行TA克隆，连接到pTA2 载体。结果可见，对KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2的扩增产物进行克隆时，使用TArget Clone^TM -Plus-，克隆效率可得到大幅度提高。

另一方面对Blend Taq的扩增产物进行克隆时，用TArget Clone^TM -Plus-相比，虽然效率有很大下降，但是使用TArget Clone也可以高效率地进行TA克隆。

产品内容

【TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
【TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
10×A-attachment Mix 10μl　

基本反应条件

「TArget Clone」^TM
灭菌蒸馏水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
PCR产物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15～25℃)、30min.

「TArget Clone^TM -Plus-」
KOD酶扩增的PCR产物 9μl
10×A-attachment Mix 1μl
Total Volume 10μl
60℃、10min.
↓
灭菌蒸馏水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
上述处理后的PCR产物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15～25℃)、30min.

几点建议

●使用纯化后PCR产物时A-attachment Mix的使用方法

如PCR反应后产生杂带，则需对PCR产物纯化后再使用。纯化后，再添加A-attachment Mix、dNTP、Mg、PCR Buffer和1×浓度的PCR Buffer后再进行反应。

参考文献

1) H. Mizuguchi et al., J. Biochem. (Tokyo), 126: 762-768　(1999)

产品使用的文献
1) F. Ge et al., Journal of　Biochemistry, 143(5): 603-609. (2008)

品名	Code No.	包装	价格	保存温度	说明书
rTth DNA Polymerase	TTH-301	250U×1支(100~200次份)	RMB350	-20℃	--
Blend Taq®/Blend Taq® -Plus-	BTQ-101	250U×1支	RMB300	-20℃
Blend Taq®/Blend Taq® -Plus-	BTQ-201	250U×1支	RMB500	-20℃
KOD Dash	LDP-101	250U×1支	RMB350	-20℃

品名	Code No.	包装	价格	保存温度
KOD -Plus-/ KOD -Plus- Ver.2	KOD-201	200U×1支	RMB 800	-20℃
KOD -Plus-/ KOD -Plus- Ver.2	KOD-211	200U×1支	RMB 1,000	-20℃
KOD FX	KFX-101	200U×1支	RMB 1,200	-20℃
KOD FX Neo	KFX-201	200U×1支	RMB 2,400	-20℃

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TArget Clone™/TArget Clone™-Plus-

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