价格表
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
| Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书 |
|---|---|---|---|---|
| FSQ-201 | 200次份 | RMB 2,000 | -20℃ |
|
ReverTra Ace® qPCR RT Kit
| Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书 |
|---|---|---|---|---|
| FSQ-101 | 200次份 | RMB 1,500 | -20℃ |
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用途
Realtime PCR用cDNA的合成
说明
| ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』开发的Realtime PCR用的逆转录试剂盒，是包含逆转录反应用的所有组分的5×浓度的完全预混型试剂，只需添加模板RNA和水即可迅速地开始反应。另外，由于采用了最适用于Realtime PCR用短链目的片段cDNA合成的反应组分，可在短时间内高效率地制备适用于Realtime PCR的cDNA模板。 |  |
| ReverTra Ace®qPCR RT试剂盒(Code No.FSQ-101)采用了本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』，反应效率非常出色。另外，通过改良，使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小，即使在PCR反应体系中添加20％体积的逆转录反应液，也能表现出良好的扩增线性。因此，最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成，可非常简便地进行操作。 |  |
特征
●可得到更广的可定量扩增区域
将Oligo dT 与Random Primer按最适比例预混，可均一、高效地在RNA全序列范围内进行逆转录，因此可得到更广的可定量扩增区域。
●与Realtime PCR试剂的配合性良好
采用了对Realtime PCR反应体系影响最小的组分，即使在PCR中添加最多20%的逆转录反应液，也可以得到很高的直线相关性。最适用于表达量少的mRNA的高灵敏度检测。
●完全预混型试剂(仅FSQ-201)
本品为放置于-20℃也不会冻结的完全预混型试剂。只要添加模板RNA和水，就可以简便高效率地合成cDNA，且重复性良好。
●容易配制逆转录反应的阴性对照(仅FSQ-201)
因为添附有相同的预混型no-RT对照，能够方便地配制逆转录反应的阴性对照。
实验例
1.模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨
在ReverTra Ace® qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中，分别添加HeLa细胞来源的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分别进行逆转录反应。然后，采用和实验例2同样的方法进行cDNA合成量的比较。结果可见，在探讨的范围内，模板RNA的量和cDNA的得率密切相关，但无论模板RNA量的多寡，仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见，在目的片段浓度有差异的样品之间，逆转录反应效率的变化并不大，因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。 |
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2.与用其他公司产品cDNA合成量的比较 以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后，在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V)，用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见，在使用本试剂盒的情况下，两个目的片段都有最高的得率。 |
3. RNase H 处理与否对检测灵敏度影响的比较 以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，使用ReverTra Ace® qPCR RT Kit（蓝线）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒，按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理（红线）/未处理（橙线）两种方法进行)。然后，按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示，用B公司的试剂盒RNase H未处理（橙线）的情况下，检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace® qPCR RT Kit（蓝线）进行反应，即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明，用本试剂盒RNase H处理与否灵敏度相等。※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。 |
4.与其他公司预混型cDNA合成试剂的逆转录效率（cDNA合成量）的比
| 以HeLa total RNA 100ng为模板，按各公司试剂盒推荐条件进行逆转录，然后进行Realtime PCR对5种目的基因进行定量。结果显示，使用本试剂盒的cDNA得率更高。 |
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●cDNA合成
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[FSQ-101]
5x RT Buffer 400μl
Enzyme Mix 100μl
Primer Mix 100μl
Nuclease-free Water 1000μl×2支
[FSQ-201]
5x RT Master Mix 400μl×1支
5x RT Master Mix no-RT Control 40μl×1支
Nuclease-free Water 1,000μl×2支
※各试剂盒均为10μl反应体系情况下，可以使用200次。
本试剂盒中附带的5x RT Master Mix 及 5x RT Master Mix no-RT Control不能用在本公司的姊妹产品 ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover (Code No. FSQ-301)中〔组分不同〕。
请务必注意。
[FSQ-101]
将RNA置于65℃，5min.
↓
置于冰上
灭菌蒸馏水 X μl
5x RT Buffer 2 μl
Enzyme Mix 0.5 μl
Primer Mix 0.5 μl
RNA 0.5pg～1μg
Total Volume 10 μl
↓
37℃, 15min.
98℃, 5min.
[FSQ-201]
将RNA置于65℃，5min.
↓
置于冰上
Nuclease-free Water Xμl
5x RT Master Mix 2μl
RNA template 1pg～1μg
Total volume 10μl
↓
37℃, 10min.
50℃, 5min.
98℃, 5min.
4℃, hold.
●反应时间延长的效果
像tRNA等含量较多的RNA全部进行逆转录反应时，延长反应时间可提高得率，但一般情况下推荐37℃15分钟可得到足够的cDNA。
●可以使用的模板RNA的种类
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。
●无需RNase H处理
由于模板RNA的残留会对PCR产生抑制作用，一般情况下，逆转录反应结束后需通过RNase H对模板RNA进行分解。但本试剂盒采用了本公司新开发的体系，模板RNA在逆转录反应后通过非酶方法去除（正在申请专利），因此逆转录反应后无需进行RNase H处理。
FAQ请点击这里。
参考文献
1)M. Hatta et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152(2002)
2)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219-2226(2003)
3)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59-66(2002)
4)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241-246(2002)
5)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453-5460(2001)
6)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666-675(2000)
7)S.Lee et al.,Gene,245:253-266(2000)
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| TRT-101 | 10,000U×1支 | RMB 800 | -20℃ | -- |
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